| 公開(公告)號 | CN1554770A |
| 公開(公告)日 | 2004.12.15 |
| 申請(專利)號 | CN200310106227.6 |
| 申請日期 | 2003.11.07 |
| 專利名稱 | 含CpG DNA畜禽疫苗佐劑的PCR制備方法 |
| 主分類號 | C12P19/34 |
| 分類號 | C12P19/34;A61K39/39 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 深圳市未來海洋科技發(fā)展有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 朱鴻飛;李光富 |
| 地址 | 210096廣東省深圳市中心區(qū)福中一路江蘇大廈30樓45號信箱 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 王之梓 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項 | 一種能促進(jìn)畜禽疫苗效價的含CpGDNA畜禽疫苗佐劑的PCR制備方法，其特征在于：第一步：基因工程重組質(zhì)粒的制備：根據(jù)由序列為：5’----GGTGCATCGATGCAGGGGGG---3’、5’----GGTGCGTCGATGCAGGGGGG---3’及5’---TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT---3’串聯(lián)而成的D19D282006目的片段DNA的序列，合成其寡核苷酸正鏈和負(fù)鏈，在合成的寡核苷酸末端加上能與線性載體末端相匹配的堿基序列，然后將此寡核苷酸片段、退火緩沖液、及無菌重蒸水混合后，于90℃～100℃水浴中孵浴3分鐘以上，自然冷卻至室溫，形成含CpG基序的目的片段，此后將此DNA片段插入線性載體的相應(yīng)的酶切位點，最后，將其轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌而得到的基因工程重組質(zhì)粒；第二步：根據(jù)目的片段兩端的重組質(zhì)粒DNA序列，設(shè)計特異引物；第三步：以重組質(zhì)粒為模板，加入特異引物，并進(jìn)行三溫循環(huán)的PCR擴(kuò)增，具體參數(shù)為：92℃～98℃預(yù)變性5～10分鐘；92℃～98℃，45～60秒，50～58℃，45～60秒，72℃，45～60秒，進(jìn)行30～35個循環(huán)；最后在72℃延伸10分鐘。 |
| 摘要 | 含CpG DNA畜禽疫苗佐劑的PCR制備方法，據(jù)由序列為：5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’、5’-GGTGCGTCGATGCAGGGGGG-3’及5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’串聯(lián)而成的D19D282006 DNA片段的序列，合成其正鏈和負(fù)鏈，在合成的寡核苷酸末端加能與載體末端匹配的堿基，將此寡核苷酸片段、退火緩沖液、無菌重蒸水混合后，于90℃～100℃水浴中3分鐘以上，冷卻至室溫，形成含CpG基序的目的片段，將DNA片段插入載體相應(yīng)的酶切位點，并將其轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌得到重組質(zhì)粒；據(jù)目的片段兩端的重組質(zhì)粒DNA序列，設(shè)計特異引物；以重組質(zhì)粒為模板，加入特異引物，進(jìn)行三溫循環(huán)PCR擴(kuò)增，具體參數(shù)為：92℃～98℃預(yù)變性5～10分鐘；92℃～98℃，45～60秒，50～58℃，45～60秒，72℃，45～60秒，進(jìn)行30～35個循環(huán)；最后在72℃延伸10分鐘。 |
| 國際公布 |
