動物細胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數的方法
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公開(公告)號
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CN1557948A
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公開(公告)日
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2004.12.29
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申請(專利)號
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CN200410025862.6
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申請日期
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2004.02.12
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專利名稱
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動物細胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數的方法
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主分類號
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C12N5/16
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分類號
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C12N5/16;C12P21/00
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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陳志南
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發(fā)明(設計)人
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米 力;馮 強;李 玲;王賢輝
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地址
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710032陜西省西安市長樂西路17號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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西安通大專利代理有限責任公司
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代理人
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李鄭建
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國省代碼
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陜西;61
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主權項
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一種生產重組蛋白治療藥物的動物細胞無血清懸浮培養(yǎng)工藝過程控制參數的方法，動物細胞包括雜交瘤或CHO或SP2/0或NSO工程細胞，這些細胞分泌表達重組蛋白治療藥物；培養(yǎng)工藝控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物的速率，結合灌流無血清基礎培養(yǎng)基降低代謝產物濃度的方法；其特征在于，包括以下步驟：1)用機械攪拌式生物反應器無血清懸浮培養(yǎng)動物細胞，起始接種細胞密度為1×105～3×105cells/ml；培養(yǎng)環(huán)境維持在溫度36℃-37℃、pH值為6.5-7.4、攪拌速度40-80轉/分、溶氧濃度即空氣飽和度40％～80％；2)培養(yǎng)過程參數主要采用針對特定細胞生長代謝需求，設定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限濃度指標，控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物的速率；過程控制的參數包括：a.無血清培養(yǎng)基起始谷氨酰胺的濃度為2.0～3.5mM；b.無血清培養(yǎng)基起始葡萄糖的濃度為0～5g/L；c.培養(yǎng)過程谷氨酰胺的最低下限為0.1～0.3mM；d.培養(yǎng)過程葡萄糖的最低下限為0.25～0.5g/L；e.培養(yǎng)過程氨離子的最高上限為2～4mM；f.培養(yǎng)過程乳酸的最高上限為15～25mM；g.培養(yǎng)過程通過氧氣攝入率即qOUR的變化，即時監(jiān)測反應細胞生長狀態(tài)；h.培養(yǎng)過程細胞的氧氣攝入率在qOUR＝0.10×10-12～0.15×10-12mol/cell/h；當qOUR≤0.07×10-12mol/cell/h，需改變流加速率或灌流速率，或調整培養(yǎng)環(huán)境；i.當培養(yǎng)液中谷氨酰胺、葡萄糖濃度低于下限時，開始流加濃縮營養(yǎng)物；當培養(yǎng)液中氨和乳酸的濃度高于上限時，開始灌流無血清基礎培養(yǎng)基，灌流速率為0.3-0day-1；3)培養(yǎng)過程細胞由對數生長期進入平穩(wěn)期并維持較長時間，其產物濃度逐漸升高，當細胞群體生長處于衰退期且產物濃度不再持續(xù)增加時停止培養(yǎng)。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種動物細胞無血清懸浮培養(yǎng)生產重組蛋白治療藥物的工藝過程控制參數方法，該工藝采用流加濃縮的能源物質和氨基酸，結合灌流基礎培養(yǎng)基的方法。過程控制參數主要針對特定細胞生長代謝需求，設定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限濃度指標，控制流加濃縮的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物的速率，結合灌流無血清基礎培養(yǎng)基降低代謝產物濃度的方法；采用氧氣攝入率即時監(jiān)測反應細胞生長狀態(tài)；用計算機程控補料系統(tǒng)精確控制流加速率；該工藝特別適宜雜交瘤細胞的大規(guī)模培養(yǎng)生產治療用抗體，具有穩(wěn)定性好、可控性強、過程控制指標明確、可操作性強、批次間結果差異小等特點。
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國際公布
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