| 公開(公告)號 | CN1597987A |
| 公開(公告)日 | 2005.03.23 |
| 申請(專利)號 | CN200410046626.2 |
| 申請日期 | 2004.08.03 |
| 專利名稱 | 硅殼納米顆粒檢測SARS病毒基因組片斷的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 湖南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 譚蔚泓;王柯敏;龔萍;何曉曉 |
| 地址 | 410082湖南省長沙市河西岳麓山湖南大學(xué)化學(xué)生物傳感與計量學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 湖南兆弘專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 趙洪 |
| 國省代碼 | 湖南;43 |
| 主權(quán)項 | 一種硅殼納米顆粒檢測SARS病毒基因組片斷的方法，其特征在于：一、構(gòu)建三明治結(jié)構(gòu)的檢測模型，即構(gòu)建由將待檢測的SARS病毒基因組片斷、標(biāo)記有熒光納米檢測信號的硅殼熒光納米探針、以及能與玻璃芯片相聯(lián)的寡核苷酸探針組成的類似三明治結(jié)構(gòu)的檢測模型；二、設(shè)計對SARS病毒進(jìn)行基因片斷檢測的各探針序列和檢測序列以及PCR擴(kuò)增的引物序列，根據(jù)SARS基因組序列，通過BLAST分析SARS病毒基因組，篩選出與人類及其它病毒基因組無同源性的2個探針序列，其中之一作為硅殼磁性納米探針的序列和硅殼熒光納米探針的序列，另一段作為與玻璃芯片基片相連接的探針的序列；而包含這2段序列的100bp的序列作為SARS病毒基因組的檢測序列；再用primerexpress2.0引物設(shè)計軟件設(shè)計1套PCR引物；三、合成與制備用于SARS病毒基因病毒組提取與純化的硅殼磁性納米探針和對特異SARS病毒基因組片斷進(jìn)行熒光檢測的硅殼熒光納米探針及玻璃芯片，將制備的磁性納米顆粒和表面氨基化熒光納米顆粒用生物素化的牛血清白蛋白以及鏈霉親和素修飾好，然后聯(lián)接上合成的cDNA，制備成修飾有與SARS病毒基因組具有35個堿基互補(bǔ)cDNA序列的硅殼磁性納米探針和熒光納米探針；在醛基化玻璃芯片上修飾生物素化的牛血清白蛋白以及鏈霉親和素制備成玻璃芯片基片；四、檢測，其具體過程為：1)雜交：硅殼磁性納米探針與SARS病毒基因片斷及其它非SARS病毒基因片斷的樣品進(jìn)行雜交，2)磁分離：利用硅殼磁性納米顆粒的磁性分離作用將SARS病毒基因組從混合樣品中分離和純化出來；3)PCR擴(kuò)增：純化的SARS病毒基因組通過一對特定的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到100bp的擴(kuò)增產(chǎn)物；4)熒光檢測：與擴(kuò)增產(chǎn)物有35個堿基互補(bǔ)序列的熒光納米探針再和擴(kuò)增產(chǎn)物以及同樣修飾有34個堿基互補(bǔ)序列的玻璃芯片以一種類似三明治結(jié)構(gòu)的模型進(jìn)行雜交，而后用激光共聚焦熒光顯微鏡對芯片進(jìn)行掃描檢測。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種硅殼納米顆粒檢測SARS病毒基因組片斷的方法，其特點(diǎn)是構(gòu)建了用于SARS病毒檢測的三明治模型，利用自制的修飾有與SARS病毒基因組特有序列互補(bǔ)的cDNA片斷的硅殼磁性納米探針對含有SARS病毒基因組的樣本進(jìn)行病毒基因組的提取與純化，再在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR擴(kuò)增)對病毒基因片斷進(jìn)行擴(kuò)增的基礎(chǔ)上，用修飾有與SARS病毒基因片斷特異序列互補(bǔ)的cDNA片斷的硅殼熒光納米探針及玻璃芯片對SARS病毒基因片斷進(jìn)行檢測。本發(fā)明的檢測方法具有快捷，靈敏度和特異性高，穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。 |
| 國際公布 |
