| 公開(公告)號 | CN1696303A |
| 公開(公告)日 | 2005.11.16 |
| 申請(專利)號 | CN200510016716.1 |
| 申請日期 | 2005.04.18 |
| 專利名稱 | 人類細(xì)胞周期素A基因的提取與純化方法 |
| 主分類號 | C12P19/34 |
| 分類號 | C12P19/34;C07H21/04 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 曲曉剛;包蕙心 |
| 地址 | 130022吉林省長春市人民大街5625號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 長春科宇專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 馬守忠 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種人類細(xì)胞周期素A基因的提取與純化方法，其步驟包括(1)從大腸桿菌中用堿裂解法提取質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因，其特征在于還包括如下步驟：(2)提取的質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因用限制性內(nèi)切酶EcoRI消化稱之為酶切法，具體的酶切方法是采用如下的物質(zhì)與配比：限制性酶切酶EcoRI4～8μl10×緩沖液5～10μl帶有人細(xì)胞周期素A基因的質(zhì)粒45～50μl滅菌水80～90μl保持總體積：150μl反應(yīng)條件：溫度為35～40℃，時間為8～24小時質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因濃度為10～15μg(3)待質(zhì)粒pGEM-人類細(xì)胞周期素A基因消化完全后，用0.7％的瓊脂糖凝膠電泳分離基因片段和載體，在100V電壓下保持2.5小時；人類細(xì)胞周期素A基因片段與載體經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離后，在紫外燈下將人類細(xì)胞周期素A基因條帶盡可能窄的切下來，切成小塊后裝入離心管中，加入20℃的純水中正好將其淹沒，放置12小時，并振搖數(shù)次；然后用最大轉(zhuǎn)速1200r/min離心機(jī)離心10分鐘，使瓊脂糖膠塊沉在離心管底部，吸出的上層水溶液即為回收的人類細(xì)胞周期素A基因溶液；經(jīng)過與它的體積比為1∶1的酚—氯仿抽提去除蛋白后，裝入透析袋對水透析24小時；透析后的水溶液在真空度為50×10-3Pa，溫度為-50℃的條件下，經(jīng)凍干機(jī)凍干成粉末，用緩沖液溶解；沉在離心管底部的凝膠可以再次浸泡，使人類細(xì)胞周期素A基因全部深出。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于人類細(xì)胞周期素A基因的制備方法，涉及一種人類細(xì)胞周期素A基因的提取與純化的方法。從大腸桿菌中提取含有基因片段的質(zhì)粒，經(jīng)過限制性內(nèi)切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳分離基因片段與載體，從凝膠中回收細(xì)胞周期素A基因片段并純化。這種方法不會對基因產(chǎn)生損傷，而且具有較高的回收率。本發(fā)明的方法可以用于提取和純化人類細(xì)胞周期素A基因。 |
| 國際公布 |
