公開(公告)號
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CN1300321C
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公開(公告)日
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2007.02.14
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申請(專利)號
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CN200410041045.X
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申請日期
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2004.06.17
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專利名稱
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對腫瘤細胞有促凋亡功能的Survivin突變體重組腺病毒及獲得方法
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主分類號
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C12N15/861(2006.01)I
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分類號
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C12N15/861(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國科學技術(shù)大學
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發(fā)明(設(shè)計)人
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吳 緬;那沙·阿丁·霍蒂;朱的娥;宋質(zhì)銀;王 宜
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地址
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230026安徽省合肥市金寨路96號中國科學技術(shù)大學專利辦公室
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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合肥華信專利商標事務(wù)所
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代理人
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余成俊
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國省代碼
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安徽;34
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主權(quán)項
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一種對腫瘤細胞有促凋亡功能的Survivin突變體重組腺病毒,包括突變的Survivin基因,其特征在于,所述的Survivin基因序列的第158位堿基a突變?yōu)閏,其基因序列表達式為atgggtgccccgacgttgccccctgcctggcagccctttctcaaggaccaccgcatctctacattcaagaactggcccttcttggagggctgcgcctgcaccccggagcggatggccgaggctggcttcatccactgccccactgagaacgagccagc158cttggcccagtgtttcttctgcttcaaggagctggaaggctgggagccagatgacgaccccatagaggaacataaaaagcattcgtccggttgcgctttcctttctgtcaagaagcagtttgaagaattaacccttggtgaatttttgaaactggacagagaaagagccaagaacaaaattgcaaaggaaaccaacaataagaagaaagaatttgaggaaactgcgaagaaagtgcgccgtgccatcgagcagctggctgccatggattga蛋白質(zhì)序列第53位氨基酸D相應地突變?yōu)锳,蛋白質(zhì)序列表達式為:MGAPTLPPAWQPFLKDHRISTFKNWPFLEGCACTPERMAEAGFIHCPTENEPA53LAQCFFCFKELEGWEPDDDPIEEHKKHSSGCAFLSVKKQFEELTLGEFLKLDRERAKNKIAKETNNKKKEFEETAKKVRRAIEQLAAMD。
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摘要
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本發(fā)明涉及分子生物學領(lǐng)域,具體涉及生物基因工程技術(shù)。所述的Survivin突變體重組腺病毒,將Survivin基因序列的第158位堿基a突變?yōu)閏,蛋白質(zhì)序列第53位氨基酸D相應地突變?yōu)锳。其獲得方法包括引入突變、構(gòu)建質(zhì)粒和包裝病毒。引入突變的步驟是首先根據(jù)已知野生型Survivin序列設(shè)計引物1和引物2,再根據(jù)突變原理設(shè)計含突變的引物3和引物4;用引物1和引物2從HeLa庫中釣出Survivin基因,再分別擴增Survivin左右兩部分片段,回收后等量加入,變性退火再循環(huán),形成全長雙鏈Survivin后進行第三輪PCR循環(huán),擴增出含突變的Survivin(Surv-D53A),此后再通過生物基因工程中常用方法構(gòu)建質(zhì)粒和包裝病毒。從多項實驗結(jié)果看出,本發(fā)明的重組腺病毒強烈誘導肝癌細胞、子宮頸癌細胞、肺癌細胞等癌細胞凋亡。
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國際公布
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