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對腫瘤細胞有促凋亡功能的Survivin突變體重組腺病毒及獲得方法

公開(公告)號 CN1300321C  
公開(公告)日 2007.02.14  
申請(專利)號 CN200410041045.X  
申請日期 2004.06.17  
專利名稱 對腫瘤細胞有促凋亡功能的Survivin突變體重組腺病毒及獲得方法  
主分類號 C12N15/861(2006.01)I  
分類號 C12N15/861(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國科學技術(shù)大學  
發(fā)明(設(shè)計)人 吳 緬;那沙·阿丁·霍蒂;朱的娥;宋質(zhì)銀;王 宜  
地址 230026安徽省合肥市金寨路96號中國科學技術(shù)大學專利辦公室  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 合肥華信專利商標事務(wù)所  
代理人 余成俊  
國省代碼 安徽;34  
主權(quán)項 一種對腫瘤細胞有促凋亡功能的Survivin突變體重組腺病毒,包括突變的Survivin基因,其特征在于,所述的Survivin基因序列的第158位堿基a突變?yōu)閏,其基因序列表達式為atgggtgccccgacgttgccccctgcctggcagccctttctcaaggaccaccgcatctctacattcaagaactggcccttcttggagggctgcgcctgcaccccggagcggatggccgaggctggcttcatccactgccccactgagaacgagccagc158cttggcccagtgtttcttctgcttcaaggagctggaaggctgggagccagatgacgaccccatagaggaacataaaaagcattcgtccggttgcgctttcctttctgtcaagaagcagtttgaagaattaacccttggtgaatttttgaaactggacagagaaagagccaagaacaaaattgcaaaggaaaccaacaataagaagaaagaatttgaggaaactgcgaagaaagtgcgccgtgccatcgagcagctggctgccatggattga蛋白質(zhì)序列第53位基酸D相應地突變?yōu)锳,蛋白質(zhì)序列表達式為:MGAPTLPPAWQPFLKDHRISTFKNWPFLEGCACTPERMAEAGFIHCPTENEPA53LAQCFFCFKELEGWEPDDDPIEEHKKHSSGCAFLSVKKQFEELTLGEFLKLDRERAKNKIAKETNNKKKEFEETAKKVRRAIEQLAAMD。  
摘要 本發(fā)明涉及分子生物學領(lǐng)域,具體涉及生物基因工程技術(shù)。所述的Survivin突變體重組腺病毒,將Survivin基因序列的第158位堿基a突變?yōu)閏,蛋白質(zhì)序列第53位氨基酸D相應地突變?yōu)锳。其獲得方法包括引入突變、構(gòu)建質(zhì)粒和包裝病毒。引入突變的步驟是首先根據(jù)已知野生型Survivin序列設(shè)計引物1和引物2,再根據(jù)突變原理設(shè)計含突變的引物3和引物4;用引物1和引物2從HeLa庫中釣出Survivin基因,再分別擴增Survivin左右兩部分片段,回收后等量加入,變性退火再循環(huán),形成全長雙鏈Survivin后進行第三輪PCR循環(huán),擴增出含突變的Survivin(Surv-D53A),此后再通過生物基因工程中常用方法構(gòu)建質(zhì)粒和包裝病毒。從多項實驗結(jié)果看出,本發(fā)明的重組腺病毒強烈誘導肝癌細胞、子宮頸癌細胞、癌細胞等癌細胞凋亡。  
國際公布  
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