公開(公告)號
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CN1318586C
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公開(公告)日
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2007.05.30
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申請(專利)號
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CN02822098.6
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申請日期
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2002.10.30
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專利名稱
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短的雙鏈RNAs的體外合成方法
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主分類號
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C12N15/11(2006.01)I
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分類號
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C12N15/11(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;A61K31/713(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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2001.11.5 US 60/337,975
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申請(專利權(quán))人
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詹森藥業(yè)有限公司
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發(fā)明(設計)人
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M·D·德貝克;A·N·哈里斯
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地址
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比利時比爾斯
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頒證日
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國際申請
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2002-10-30 PCT/EP2002/012165
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進入國家日期
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2004.05.08
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專利代理機構(gòu)
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中國專利代理(香港)有限公司
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代理人
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李 波;徐雁漪
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國省代碼
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比利時;BE
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主權(quán)項
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一種用于合成長度少于30個核苷酸的靶特異性短的雙鏈RNAs的方法,包括以下步驟:a)在一種反應混合物中混合靶特異性有義寡核苷酸模板和T7RNA聚合酶,以便形成模板延伸的有義寡核糖核苷酸產(chǎn)物;b)在一種反應混合物中混合靶特異性反義寡核苷酸模板和T7RNA聚合酶,以便形成模板延伸的反義寡核糖核苷酸產(chǎn)物;和c)讓在步驟a)中獲得的有義寡核糖核苷酸產(chǎn)物與在步驟b)中獲得的互補性反義寡核糖核苷酸產(chǎn)物雜交,其特征在于:步驟a)和b)的寡核苷酸模板包括由圖1所示的截短的T7 RNA聚合酶啟動子序列組成的RNA聚合酶啟動子序列,在所述模板鏈的5’末端用靶特異性模板序列延伸,其中,所述靶特異性模板序列包括位于5’末端的兩個鳥苷,和位于3’末端的兩個胞苷。
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摘要
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本發(fā)明涉及合成短的雙鏈RNAs的領(lǐng)域。披露了利用噬菌體聚合酶和用靶序列特異性單鏈DNA寡核苷酸作模板的體外轉(zhuǎn)錄方法。本發(fā)明特別適用于合成短的干擾RNAs(siRNAs),業(yè)已證實這種干擾RNAs是在植物中的轉(zhuǎn)錄后基因沉默期間引起序列特異性RNA降解,以及無脊椎動物和脊椎動物系統(tǒng)的RNA干擾中的關(guān)鍵中間體。
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國際公布
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2003-05-15 WO2003/040294 英
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