| 公開(公告)號 | CN1806847A |
| 公開(公告)日 | 2006.07.26 |
| 申請(專利)號 | CN200510036959.1 |
| 申請日期 | 2005.09.02 |
| 專利名稱 | 人源性胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑的基因工程生產(chǎn)方法 |
| 主分類號 | A61K38/55(2006.01)I |
| 分類號 | A61K38/55(2006.01)I;C12N15/57(2006.01)I;A61P1/18(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中山大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 徐安龍;任宇鋒;賴春娥;區(qū)景行;王 磊 |
| 地址 | 510275廣東省廣州市新港西路135號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 華 輝 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項 | 人源性胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑的基因工程生產(chǎn)方法，包括以下步驟： (1)按畢赤酵母密碼子偏好性化學(xué)合成人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑基因，其核苷酸序列為： 5’-GATTCTCTGGGTCGTGAAGCCAAATGTTATAACGAACTGAACGGTTGTACCAAAATTTATGATCCAGTTTGTGGTACCGATGGTAACACCTATCCAAACGAATGTGTTCTGTGTTTTGAAAACCGTAAACGTCAGACCTCTATTCTGATTCAGAAATCTGGTCCATGT-3’； (2)設(shè)計引物，以所合成的人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑基因為模板，進行PCR擴增； (3)將所獲得的編碼人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑的基因克隆在質(zhì)粒中，進行DNA序列測序分析與所設(shè)計的人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑基因序列完全相符； (4)經(jīng)序列分析后的人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑基因克隆到商業(yè)化表達載體pPIC9K，轉(zhuǎn)化甲醇酵母菌株KM71； (5)對甲醇酵母菌株KM71進行甲醇誘導(dǎo)表達。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了人源性胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑的基因工程生產(chǎn)方法。本發(fā)明采用真核分泌表達的方法來制備重組人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑，包括：(1)具有工程菌密碼子偏好性人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑基因的合成以及表達載體的構(gòu)建；(2)工程菌的構(gòu)建及發(fā)酵；(3)重組人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑的制備與純化。本發(fā)明采用基因工程技術(shù)制備重組人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制劑，克服了從人體組織中提取，成本高且來源少等缺點。 |
| 國際公布 |
