一種等溫反應(yīng)檢測具序列特異性的DNA和RNA的方法
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公開(公告)號
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CN1810989A
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公開(公告)日
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2006.08.02
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申請(專利)號
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CN200510036871.X
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申請日期
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2005.08.31
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專利名稱
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一種等溫反應(yīng)檢測具序列特異性的DNA和RNA的方法
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主分類號
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C12Q1/68(2006.01)I
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分類號
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C12Q1/68(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國科學(xué)院廣州分院
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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彭 濤
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地址
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510070廣東省廣州市先烈中路100號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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廣州科粵專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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余炳和
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國省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項(xiàng)
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一種等溫反應(yīng)檢測目的基因方法，在恒溫條件下探針與目標(biāo)基因結(jié)合，后通過切刻內(nèi)切酶作用來檢測目的基因，其特征在于： 設(shè)計(jì)單鏈DNA“報(bào)告探針”，所說的“報(bào)告探針”與目標(biāo)基因序列的核酸切刻內(nèi)切酶識別序列及及其周圍序列部分互補(bǔ)，并可使切刻內(nèi)切酶在報(bào)告探針切刻； 按以下步驟進(jìn)行目的基因檢測： 1.1、在待檢測樣品的DNA或RNA中加入“報(bào)告探針”及切刻內(nèi)切酶，“報(bào)告探針”與含有切刻內(nèi)切酶識別序列的目標(biāo)基因序列雜交后兩識別序列結(jié)合形成切刻內(nèi)切酶識別位點(diǎn)，該位點(diǎn)僅可使切刻內(nèi)切酶在“報(bào)告探針”鏈切刻，形成兩段較短的片段，在此反應(yīng)溫度下，短片段形成的雙鏈不穩(wěn)定，會與“核驗(yàn)探針”脫落，成為5’部分“報(bào)告探針”和3’部分“報(bào)告探針”； 1.2、被切刻的“報(bào)告探針”分離的目的基因，又與另一完整的“報(bào)告探針”雜交，重復(fù)1.1所述反應(yīng)，產(chǎn)生新的5’部分“報(bào)告探針”和3’部分“報(bào)告探針”； 1.3、通過檢測產(chǎn)生的3’部分“報(bào)告探針”和/或5’部分“報(bào)告探針”顯示是否有目的基因序列存在。
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摘要
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一種等溫反應(yīng)檢測具序列特異性的DNA和RNA的方法，通過在特異探針中設(shè)計(jì)DNA切刻內(nèi)切酶的識別位點(diǎn)，在DNA探針與目標(biāo)序列雜交后，DNA切刻內(nèi)切酶將探針切刻為兩段，從而降低了其與目標(biāo)序列結(jié)合的穩(wěn)定性并與目標(biāo)序列分離。目標(biāo)序列因此能與另一完整探針再次雜交并被切刻內(nèi)切酶切刻。如此循環(huán)。切刻下的小片段可應(yīng)用凝膠電泳的方法、熒光識別儀、顏色變化、傳感器、質(zhì)譜、檢驗(yàn)層析試條或微陣列系統(tǒng)來檢測特定產(chǎn)物的存在。該方法可以在等溫情況下使待檢基因呈線性或指數(shù)增加，使反應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)就能完成，因而具有快速、靈敏、特異、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)�？蓱�(yīng)用于包括動物、植物和微生物的基因檢測。
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國際公布
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