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一種制備人載脂蛋白基因重組蛋白的方法

公開(公告)號 CN1268761C  
公開(公告)日 2006.08.09  
申請(專利)號 CN02136716.7  
申請日期 2002.08.29  
專利名稱 一種制備人載脂蛋白基因重組蛋白的方法  
主分類號 C12P21/02(2006.01)I  
分類號 C12P21/02(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 上海凱曼生物科技有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 周鳴南;龔邦強(qiáng)  
地址 200233上海市田林路219號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海開祺知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司  
代理人 費(fèi)開逵  
國省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種人載脂蛋白ApoAIMilano的制備方法,其特征在于 1-1、采用RT-PCR技術(shù)從人肝細(xì)胞中獲得人載脂蛋白基因片段; 1-2、通過PCR直接位點(diǎn)突變的方法制得人載脂蛋白基因; 1-3、采用PCR方法制備上述的兩段基因片段β-B,A-II亞克隆到pMD-T載體上,進(jìn)行DNA序列測定,然后從pMD-T載體上切下,克隆到含有Tac啟動子,LacI抑制蛋白基因、t0轉(zhuǎn)錄終止子和Ampr青霉素抗性篩選基因、coLEI復(fù)制序列的表達(dá)載體pMZG上,再用SphI,HindIII限制性內(nèi)切酶消化后,按β-B(500bp)A-II(250bp)SphI_SalISalI_HindIIIpMZG(3400bp)SphI_HindIII進(jìn)行拼裝連接,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMZG-3,將此構(gòu)建的表達(dá)人載脂蛋白重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入宿主菌大腸桿菌內(nèi),組建成工程菌; 1-4、表達(dá)工程菌發(fā)酵、發(fā)酵液處理、純化,得人載脂蛋白; 1-5、純化的人載脂蛋白用谷胱甘肽、還原型谷胱甘肽處理,形成人載脂蛋白的二聚體肽。  
摘要 本發(fā)明公開了一種人載脂蛋白ApoAIMilano二聚體肽的制備方法,它采用基因重組技術(shù)將人的ApoAIMilano基因克隆到表達(dá)載體上,構(gòu)建成表達(dá)重組質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌,組建成表達(dá)工程菌,經(jīng)發(fā)酵、純化工藝獲得人ApoAIMilano蛋白,它可用于治療急性動脈粥樣硬化斑塊形成而導(dǎo)致的心絞痛、心肌梗死等冠狀動脈綜合癥。  
國際公布  
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