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表達(dá)人類(lèi)反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1286980C  
公開(kāi)(公告)日 2006.11.29  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN200410061236.2  
申請(qǐng)日期 2004.11.30  
專(zhuān)利名稱(chēng) 表達(dá)人類(lèi)反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法  
主分類(lèi)號(hào) C12N15/861(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C12N15/861(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I;A61P9/04(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 汪道文;肖 嘯;趙春霞;汪培華  
地址 430030湖北省武漢市解放大道1095號(hào)轉(zhuǎn)同濟(jì)醫(yī)院內(nèi)科汪道文  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 武漢開(kāi)元專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司  
代理人 王和平  
國(guó)省代碼 湖北;42  
主權(quán)項(xiàng) 一種表達(dá)人類(lèi)反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒,該重組腺相關(guān)病毒由天然狀態(tài)的腺相關(guān)病毒和腺病毒經(jīng)分子生物學(xué)方法人工剪切、修飾和加工而成,該載體系統(tǒng)包括包裝質(zhì)粒pXX2,輔助質(zhì)粒pXX6,真核表達(dá)載體pXXUF1,并在真核表達(dá)載體pXXUF1內(nèi)反向插入了人類(lèi)受磷蛋白基因編碼序列,其步驟: 1)包裝質(zhì)粒pXX2:它含有編碼腺相關(guān)病毒Rep蛋白和Cap蛋白的 編碼序列,并在上游和下游各插入一個(gè)p5啟動(dòng)子; 2)輔助質(zhì)粒pXX6:其刪除了腺病毒的致病基因序列,保留了腺病 毒E1A、E2A和VA1RNA基因; 3)真核表達(dá)載體pXXUF1:所用的是CMV啟動(dòng)子,其含有Not 1 多克隆位點(diǎn),可以連接不同的目的基因,pXXUF1反向連接人受 磷蛋白基因,該載體含有rAAV轉(zhuǎn)基因表達(dá)所必須的末端ITRs 重復(fù)序列。  
摘要 本發(fā)明涉及一種表達(dá)人類(lèi)反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法,屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域,用于心力衰竭及其他相關(guān)疾病的基因治療。該重組腺相關(guān)病毒由天然狀態(tài)的腺相關(guān)病毒和腺病毒經(jīng)分子生物學(xué)方法人工剪切、修飾和加工而成,該載體系統(tǒng)包括包裝質(zhì)粒pXX2,輔助質(zhì)粒pXX6,真核表達(dá)載體pXXUF1和pXXUF3,并在真核表達(dá)載體pXXUF1內(nèi)反向插入了人類(lèi)受磷蛋白基因編碼序列。本發(fā)明的表達(dá)人類(lèi)反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒制備方法成功,所制備的重組腺相關(guān)病毒滴度高,能驅(qū)動(dòng)目的基因長(zhǎng)期有效的表達(dá),可以用于心梗及其他相關(guān)性疾病所致心力衰竭的治療。  
國(guó)際公布  
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