| 公開(公告)號 | CN1876812A |
| 公開(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申請(專利)號 | CN200510075065.3 |
| 申請日期 | 2005.06.09 |
| 專利名稱 | 應(yīng)用RNA酶保護(hù)法高通量篩選天然存在的正義-反義轉(zhuǎn)錄物 |
| 主分類號 | C12N15/09(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉德培;柯細(xì)松;宮 環(huán);陸 璐;屈 祎 |
| 地址 | 100005北京市東城區(qū)東單三條5號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 本發(fā)明涉及一種高通量篩選細(xì)胞內(nèi)真正的正義-反義轉(zhuǎn)錄物的新方法，實(shí)施步驟為： i. 提取組織總RNA。 ii. 用RNaseI處理總RNA。 iii. 證實(shí)殘余的RNA是雙鏈RNA(Double-stranded RNA，dsRNA)。 iv. 證實(shí)殘余的RNA是細(xì)胞內(nèi)源的RNA。 v. 把雙鏈RNA變性為單鏈RNA。 vi. 把單鏈RNA逆轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)的DNA(Complement DNA，cDNA)。 vii. 在cDNA的3’端加上多聚A。 viii. 合成cDNA的第二條鏈。 ix. 制備雙鏈DNA(Double-stranded DNA，dsDNA)的一個平端和一個粘端。 x. 把雙鏈DNA克隆入克隆載體。 xi. 把重組載體轉(zhuǎn)化如宿主細(xì)胞，構(gòu)建總RNA中NSATs的cDNA文庫。 xii. 對克隆進(jìn)行序列測定。 xiii. 把克隆序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種高通量篩選天然存在的正義-反義轉(zhuǎn)錄物(Naturalsense-antisense transcripts，NSATs)的新方法。本發(fā)明利用細(xì)胞內(nèi)NSATs是雙鏈RNA分子的特點(diǎn)，以及雙鏈RNA分子能夠免受單鏈RNA特異的RNase I的酶解作用，從而在RNase I酶解反應(yīng)中保留下來的特性，建立了通過實(shí)驗(yàn)的手段來實(shí)現(xiàn)高通量篩選細(xì)胞內(nèi)真正的NSATs的方法。利用這一方法，可以通過高通量篩選各種來源和狀態(tài)的組織或細(xì)胞內(nèi)真正的正義RNA-反義RNA復(fù)合物，理論上，通過該方法可以獲得細(xì)胞內(nèi)任何一個存在的NSATs。在鑒定RNA作用的靶向基因或篩選潛在的RNA藥物時，本發(fā)明也有重要的應(yīng)用價值。 |
| 國際公布 |
