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用于檢測(cè)臨床樣品中的病原分枝桿菌的方法

公開(公告)號(hào) CN1930302A  
公開(公告)日 2007.03.14  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200380110979.8  
申請(qǐng)日期 2003.12.09  
專利名稱 用于檢測(cè)臨床樣品中的病原分枝桿菌的方法  
主分類號(hào) C12Q1/68(2006.01)I  
分類號(hào) C12Q1/68(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 印度科學(xué)工業(yè)研究所  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 拉哈·哈里·達(dá)斯;阿賈伊·庫(kù)馬爾;梅格帕蒂·辛格  
地址 印度新德里  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng) 2003-12-09 PCT/IB2003/005767  
進(jìn)入國(guó)家日期 2006.07.07  
專利代理機(jī)構(gòu) 北京銀龍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司  
代理人 鐘 晶  
國(guó)省代碼 印度;IN  
主權(quán)項(xiàng) 檢測(cè)臨床樣品中病原分枝桿菌的方法,所述方法包括以下步驟: a.通過常規(guī)方法凈化臨床樣品,去除包括粘液的污染物, b.用改進(jìn)的裂解緩沖液處理步驟(a)所得的經(jīng)處理的臨床樣品以使活病原分枝桿菌失活,從而使過程對(duì)使用者安全, c.利用改進(jìn)的方法,從步驟(b)所得的經(jīng)處理的臨床樣品中提取基因組DNA,從而提高DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量, d.從步驟(c)所得的DNA設(shè)計(jì)用于檢測(cè)病原分枝桿菌的序列SEQ ID No.4,所述設(shè)計(jì)的序列包括步驟(c)所得DNA所選出的SEQ ID No.3的基因間區(qū)域、含SEQ ID No.l的mmaAl基因部分的側(cè)翼區(qū)域和SEQ ID No.2的mmaA2基因部分, e.設(shè)計(jì)并合成一套用于擴(kuò)增SEQ ID No.4的反向引物的特異寡核苷酸引物,其中SEQ ID No.5的為正向引物,和SEQID No.6為用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR), f.開發(fā)用于特異性擴(kuò)增(d)的SEQID No.4的PCR擴(kuò)增過程,所述過程包括使用步驟(e)中設(shè)計(jì)并合成的特異性寡核苷酸引物,用于檢測(cè)臨床樣品中病原分枝桿菌的存在,和 g.通過限制酶片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,用于區(qū)分病原分枝桿菌菌種,用于快速評(píng)估HIV的共感染。  
摘要 本發(fā)明涉及檢測(cè)諸如痰、腦脊髓液、洗出物和組織活體檢測(cè)物等臨床樣品中的病原分枝桿菌,其特征在于,利用設(shè)計(jì)的寡核苷酸引物對(duì)來延伸本發(fā)明的新DNA,所述寡核苷酸引物對(duì)能特異擴(kuò)增來自于臨床樣品的靶DNA,所述DNA位于甲基分枝菌酸合成酶基因mmaA1和mmaA2之間的基因間區(qū)域以及mmaA1和mmaA2基因中的側(cè)翼區(qū)域。  
國(guó)際公布 2005-06-23 WO2005/056831 英  
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