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防治小鵝瘟病的異源抗小鵝瘟蛋黃抗體的制備方法與應(yīng)用

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1927886A  
公開(kāi)(公告)日 2007.03.14  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN200510098365.3  
申請(qǐng)日期 2005.09.09  
專(zhuān)利名稱(chēng) 防治小鵝瘟病的異源抗小鵝瘟蛋黃抗體的制備方法與應(yīng)用  
主分類(lèi)號(hào) C07K16/10(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C07K16/10(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 重慶永健生物技術(shù)有限責(zé)任公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 何洪章  
地址 402460重慶市榮昌縣學(xué)院路158號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司  
代理人 劉繼富;顧晉偉  
國(guó)省代碼 重慶;85  
主權(quán)項(xiàng) 一種抗小鵝瘟異源蛋黃抗體制備方法,包括下列步驟: (a)將冷凍保存的患小鵝瘟疾病死亡的小鵝腸道病料按照1∶5加滅菌生理鹽水搗碎,凍融2次后,形成混合組織懸液;將混合組織懸液進(jìn)行4000rpm離心,收集上清液并于56℃處理30分鐘,每毫升加入青霉素鏈霉素1000單位,4℃處理2小時(shí);將青、鏈霉素處理后的種毒液用滅菌生理鹽水稀釋100倍,經(jīng)0.22um微孔濾膜過(guò)濾除菌,以0.1ml/只的劑量接種13-15日齡非免疫鵝胚尿囊腔,37℃孵育,棄去48小時(shí)內(nèi)的死亡鵝胚,收集48-120小時(shí)內(nèi)死亡的胚;無(wú)菌采集尿囊液及羊水; (b)將收獲的尿囊毒液中加入0.1%甲醛溶液,37℃密閉滅活48小時(shí);滅活完成后,按滅活毒液96份,滅菌吐溫-804份配制,即為制苗用抗原;按油相3份、水相1份的比例取油相、水相攪拌均勻,加入高壓均質(zhì)機(jī)中,調(diào)節(jié)壓力為35mpa,乳化制備成小鵝瘟滅活油乳劑疫苗,并加入1%硫柳汞溶液使之終濃度為萬(wàn)分之一; (c)以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原頸部皮下注射0.5ml/只;2周后,以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原頸部皮下注射1.0ml/只,進(jìn)行強(qiáng)化免疫;間隔2周后用滅活油乳劑抗原再次強(qiáng)化免疫一次,頸部皮下注射2.0ml/只;以后間隔8周進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫,每次頸部皮下注射2.0ml/只; (d)從第二次強(qiáng)化免疫后第7天開(kāi)始,每隔三天抽樣用瓊脂擴(kuò)散方法測(cè)定高免蛋黃中抗小鵝瘟特異抗體效價(jià);蛋黃與生理鹽水按1∶3(V/V)稀釋后,加與蛋黃等體積三氯甲烷進(jìn)行萃提,用瓊擴(kuò)方法檢測(cè)萃提上清液中抗小鵝瘟特異抗體效價(jià),若上清液瓊擴(kuò)抗體效價(jià)達(dá)到1∶64以上即可集蛋,用于制備小鵝瘟蛋黃抗體; (e)將蛋殼消毒,打蛋并充分除去蛋清、胚盤(pán)和系帶,收集蛋黃;于蛋黃中加入3倍體積的生理鹽水,充分?jǐn)嚢杈鶆颍缓笤诘包S液中加入與蛋黃等體積的三氯甲烷,充分振蕩混合均勻,室溫作用60分鐘,以3500-4000rpm離心30分鐘,收集上層清液備用; (f)在分離的上清液中加入終濃度為0.05%的甲醛溶液,充分?jǐn)嚢杌靹颍?7℃保溫密封8-12小時(shí);用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌,即得瓊擴(kuò)抗體效價(jià)達(dá)到1∶32及以上異源抗小鵝瘟蛋黃抗體。  
摘要 本發(fā)明為一種用于雛鵝小鵝瘟疾病的預(yù)防和治療的蛋黃抗體的制備方法。它改變了使用母鵝進(jìn)行高免用于制備抗小鵝瘟蛋黃抗體的先例,而改用鴨和雞用于抗小鵝瘟蛋黃抗體的制備,包括小鵝瘟種毒的制取,高免抗原的制取,蛋黃抗體的制取。經(jīng)臨床試驗(yàn)和使用結(jié)果表明:用本方法制備的異源小鵝瘟蛋黃抗體用于預(yù)防和治療雛鵝小鵝瘟疾病,預(yù)防率和治愈率高、藥效期長(zhǎng),藥物效果顯著,其預(yù)防率為95%以上,早期治愈率達(dá)80%以上。用該方法制成的高免抗體,成本明顯低于同源的鵝蛋黃抗體和其它血清,且可預(yù)防由同源蛋黃抗體所致的垂直傳播疾病的影響。  
國(guó)際公布  
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