| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1318446C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.05.30 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN96198905.X |
| 申請(qǐng)日期 | 1996.10.11 |
| 專利名稱 | 莫拉氏菌屬(MORAXELLA)運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白 |
| 主分類號(hào) | C07K14/22(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K14/22(2006.01)I;C07K16/12(2006.01)I;A61K39/095(2006.01)I;A61K39/116(2006.01)I;A61K39/39(2006.01)I;A61K47/48(2006.01)I;G01N33/569(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I;A61P11/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1995.10.11 US 08/540,753 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 康諾特實(shí)驗(yàn)室有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 楊燕平;L·E·邁爾斯;R·E·哈克納斯;M·H·克萊 |
| 地址 | 加拿大安大略省 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | 1996-10-11 PCT/CA1996/000684 |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | 1998.06.09 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 盧新華;齊曾度 |
| 國(guó)省代碼 | 加拿大;CA |
| 主權(quán)項(xiàng) | 制備莫拉氏菌屬菌株的經(jīng)分離和純化的未變性運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白的方法，所述莫拉氏菌屬菌株能夠表達(dá)運(yùn)鐵蛋白受體蛋白，所述蛋白特征在于其經(jīng)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定，表觀分子量為80-90kDa，且不含莫拉氏菌屬菌株的OMP B2蛋白和莫拉氏屬菌菌株的表觀分子量為105kDa的運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白，并且結(jié)合人運(yùn)鐵蛋白；所述方法包括下述步驟： (a)提供粘膜炎莫拉氏菌菌株的細(xì)胞團(tuán)塊，所述菌株在缺乏鐵的條件下生長(zhǎng)以刺激運(yùn)鐵蛋白受體蛋白的表達(dá)； (b)從所述細(xì)胞團(tuán)塊中選擇性提取水溶性蛋白質(zhì)，即通過(guò)使包含10mM-1M Tris-HCl的pH為7-8.5的含水緩沖介質(zhì)接觸細(xì)胞團(tuán)塊，超聲處理細(xì)胞團(tuán)塊使之破碎，再進(jìn)行離心，從而提供第一上清液和第一沉淀物； (c)分離第一沉淀物和第一上清液； (d)從第一沉淀物中選擇性溶解至少一種分子量為80-90kDa的運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白，即通過(guò)使包含10mM-1M Tris-HCl、0.2-2wt％的Triton X-100和2-20mM的EDTA的pH為7-8.5的含水緩沖介質(zhì)接觸第一沉淀物至少一次，超聲處理第一沉淀物使之破碎，再進(jìn)行離心，從而提供第二上清液和第二沉淀物； (e)分離第二沉淀物和第二上清液；且 (f)通過(guò)多次層析操作從第二上清液中純化分子量為80-90kDa的運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白，其中不含在選擇性溶解步驟中從第一沉淀物中溶解的其它莫拉氏菌屬蛋白質(zhì)，所述操作包括： i)在含有用含10mM-1M Tris-HCl的pH為7-8.5的含水緩沖介質(zhì)平衡的DEAE-Sephacel的第一層析柱上進(jìn)行第一次層析操作，當(dāng)該柱用所述緩沖液洗滌時(shí)，可使運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白選擇性地流出，而污染蛋白結(jié)合于柱上， ii)在含有用含10mM-1M Tris-HCl的pH為7-8.5的含水緩沖介質(zhì)平衡的SE-纖維素或S-Sepharose的第二層析柱上進(jìn)行第二次層析操作，當(dāng)該柱用所述緩沖液洗滌時(shí)，可使運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白選擇性地流出，而污染蛋白結(jié)合于柱上， iii)在含有用含5-50mM KH2PO4的pH為6-8.5的含水緩沖介質(zhì)平衡的羥基磷灰石的第三層析柱上進(jìn)行第三次層析操作，當(dāng)該柱用所述緩沖液洗滌時(shí)，可使運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白選擇性地結(jié)合于柱上，而粘膜炎莫拉氏菌菌株OMP B2蛋白和其它污染蛋白流出，和 iv)用含150-250mM KH2PO4的pH為7-8.5的含水緩沖介質(zhì)從第三層析柱上洗脫所述運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白。 |
| 摘要 | 莫拉氏菌屬菌株，尤其是粘膜炎莫拉氏菌的經(jīng)分離和純化的未變性運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白，經(jīng)SDS-PAGE測(cè)定其表觀分子量約為80-90kDa。運(yùn)鐵蛋白之受體蛋白或其片斷類似物可用于診斷應(yīng)用和免疫原性組合物中，尤其是可體內(nèi)施用于宿主以保護(hù)宿主抵抗由莫拉氏菌屬引起的疾病。 |
| 國(guó)際公布 | 1997-04-17 WO1997/013785 英 |
