公開(公告)號
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CN1935995A
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公開(公告)日
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2007.03.28
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申請(專利)號
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CN200510017150.4
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申請日期
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2005.09.21
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專利名稱
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H7亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白
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主分類號
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C12N15/09(2006.01)I
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分類號
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C12N15/09(2006.01)I;C12N15/13(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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金寧一
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發(fā)明(設(shè)計)人
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金寧一;徐一鳴;魯會軍;李 昌;韓 松;金擴(kuò)世
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地址
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130062吉林省長春市青龍路1068號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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白冬冬
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國省代碼
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吉林;22
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主權(quán)項
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一種H7亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制備方法,其特征在于: 首先重組質(zhì)粒pPIC9K-H7HA:將pMD18-TH7HA質(zhì)粒由Sal I酶切,補(bǔ)平后再經(jīng)EcoR I酶切,回收得到目的片段;pPIC9K質(zhì)粒由SnaB I、EcoR I雙酶切,去磷后回收;將以上回收產(chǎn)物經(jīng)T4連接酶連接后即獲得目的質(zhì)粒pPIC9K-H7HA; 然后進(jìn)行H7HA蛋白真核表達(dá)及制備:用BglII線性化pPIC9K-H7HA重組質(zhì)粒;線性化后將其電轉(zhuǎn)化至GS115感受態(tài)中,在MD平板中培養(yǎng)并經(jīng)MM板篩選,而后挑取單個菌落于YPD培養(yǎng)基中復(fù)蘇,提重組體基因組進(jìn)行PCR鑒定,篩選出的陽性菌株于BMGY培養(yǎng)基中搖菌,離心后轉(zhuǎn)至BMMY培養(yǎng)基中開始甲醇誘導(dǎo),產(chǎn)物離心后取上清,加入飽和硫酸銨沉淀蛋白,收集蛋白進(jìn)行進(jìn)一步純化即得到H7HA抗原蛋白。
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摘要
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一種H7亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制備方法,屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是涉及一種AIV亞型抗原蛋白——H7HA蛋白。本發(fā)明提供一種AIV關(guān)鍵的抗原蛋白H7亞型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本發(fā)明首先重組質(zhì)粒pPIC9K-H7HA,然后進(jìn)行H7HA蛋白真核表達(dá)及制備,即得到H7HA抗原蛋白。本發(fā)明以H7HA為研究對象,成功獲得了針對H7HA抗體的抗原蛋白,經(jīng)SDS-PAGE、間接ELISA檢測,具良好生物活性。其表達(dá)量高、特異性強(qiáng)、易于純化、具有完整的空間構(gòu)象等特點完全符合ELISA快速檢測試劑盒的鑒定要求。
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國際公布
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