公開(公告)號(hào)
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CN1923208A
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公開(公告)日
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2007.03.07
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200510017086.X
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申請(qǐng)日期
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2005.08.29
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專利名稱
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毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備方法及醫(yī)用用途
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主分類號(hào)
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A61K31/70(2006.01)I
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分類號(hào)
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A61K31/70(2006.01)I;A61K31/7088(2006.01)I;A61K35/12(2006.01)I;C07H21/00(2006.01)I;A61P37/04(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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張西臣
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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張西臣;李建華
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地址
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130062吉林省長(zhǎng)春市西安大路175號(hào)軍需大學(xué)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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陳宏偉
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國省代碼
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吉林;22
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主權(quán)項(xiàng)
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一種毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備方法,包括以下步驟: 1)毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備 (1)、動(dòng)物免疫: 將旋毛形線蟲免疫一歲齡羊或馬、豬、牛等動(dòng)物,檢查無傳染病后加福氏佐劑制成乳化的油包水狀,于淋巴結(jié)內(nèi)每只注射1ml,12-14天處死,取肝、脾、心、肺和腎等,進(jìn)行免疫核糖核酸提; (2)免疫核糖核酸提取 ①采用肝臟免疫核糖核酸制備方法:將羊或馬、豬、牛等動(dòng)物肝用生理鹽水洗凈,切成小塊,加入1-2倍體積0.1mol/L氯化鈉,0.05mol/L枸櫞酸三鈉Triton-100,用組織搗碎機(jī)制成勻漿,離心3500r/min 20min,得離心上清液;取上清液加入等體積0.2mol/L三乙醇胺、10g/L十二烷基硫酸鈉、0.002mol/L乙二胺四乙酸二鈉,攪拌均勻后,加等體積90%苯酚、等體積氯仿,于室溫下震蕩30min,離心3500r/min,20min,得提取物上清液,再加入等量氯仿振搖,反復(fù)2-3次,至中間層界面無明顯蛋白層為止,離心除去蛋白,收集上清液;將上清液加入1/10體積200g/L乙酸鉀和2倍體積-20℃的無水乙醇于0℃放置1小時(shí),離心,得白色沉淀;將沉淀溶解于含有0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉、0.01mol/L乙酸鈉溶液中,加等體積2.5mol/L磷酸氫二鉀,于不斷攪拌下再加等體積的乙二醇甲醚,0℃放置30min,離心,得上清液;將上清液在0℃不斷攪拌下,加入等體積0.2mol/L乙酸鈉液和1/4體積10g/L溴化十六烷基三甲基銨,0℃放置30min,離心取沉淀,用0.1mol/L乙酸鈉液、70%乙醇反復(fù)洗滌5次,至無泡沫為止;沉淀溶解于0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉,除菌過濾,測(cè)定含量,無菌灌裝,冷凍干燥,即得免疫核糖核酸制品; ②采用脾制備免疫核糖核酸 將免疫動(dòng)物馬或羊、豬、牛等動(dòng)物的脾臟去除脂肪組織,稱重,剪碎,加入用等量含5g/L十二烷基硫酸鈉、0.14mol/L氯化鈉,0.2%吐溫-80和1g/L皂土的0.01mol/L乙酸緩沖液,置組織搗碎機(jī)中制成勻漿,以3000r/min離心分離,上清液加等體積含5g/L十二烷基硫酸鈉,0.14mol/L氯化鈉和0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉的0.01mol/L的乙酸緩沖液,攪拌15min,加等體積的80%苯酚攪拌10min,以3000r/min離心20min,吸取上層水相,加1/2體積用上述乙酸緩沖液配成的90%苯酚,攪拌5min,離心3000r/min、20min;吸取上層水相,加入氯化鈉至0.1mol/L,在攪拌下加入2.5倍體積預(yù)冷至-20℃的95%乙醇,于-10℃以下冷庫沉淀,離心2000r/min、10min;收集沉淀物溶于適量的0.14mol/L氯化鈉溶液中,加入等體積氯仿,振搖10min,離心3000r/min、15min;吸取水相,攪拌下加入2.5倍體積,冷至-20℃的95%乙醇洗滌,離心2000r/min、共10min,6號(hào)垂熔漏斗過濾,無菌分裝冷凍干燥,即獲得脾免疫核糖核酸制劑。
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摘要
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本發(fā)明公開一種毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備方法,將旋毛形線蟲免疫一歲齡羊或馬、豬、牛等動(dòng)物,檢查無傳染病后加福氏佐劑制成乳化的油包水狀,于淋巴結(jié)內(nèi)每只注射1ml,12-14天處死,取肝、脾、心、肺和腎等,進(jìn)行免疫核糖核酸提取。本發(fā)明還公開了毛形屬線蟲免疫核糖核酸在防治人和動(dòng)物免疫功能低下引進(jìn)疾病的醫(yī)用用途,同時(shí)提供了相應(yīng)的藥物制劑。主要用于腫瘤病、早期癌癥、性功能低下和病毒病等免疫功能低下或缺陷引起的疾病的預(yù)防和治療,兼有保健功能。毛形屬線蟲免疫核糖核酸醫(yī)療效果好,制劑安全、作用范圍廣,適用于工業(yè)化制備,生產(chǎn)成本低。
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國際公布
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