更年安片-五味子甲素測定/五味子乙素測定-高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定更年安片中五味子甲素和五味子乙素的含量。

本方法適用于中成藥更年安片。

供試品加環(huán)己烷超聲提取，揮干，殘渣用甲醇-乙腈（1∶1) 超聲提取定容，過濾，用高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測五味子甲素和五味子乙素的吸收值，計算其含量。

1. 甲醇(色譜純)

2.乙腈(色譜純)

3. 五味子甲素對照品（中國藥品生物制品檢定所)

4. 五味子乙素對照品（中國藥品生物制品檢定所)

5. 環(huán)己烷

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑（Phenomenex C₁₈，5μm，250mm×4.6mm)，理論板數(shù)按五味子甲素和五味子乙素計應不低于5000。

1.3 紫外吸收檢測器

1.4 超聲發(fā)生器

2 色譜條件

2.1流動相：乙腈＋甲醇＋水＝15＋15＋10。

2.2檢測波長：254nm

2.3柱溫：室溫

1. 對照品儲備液的制備

精密稱取五味子甲素和五味子乙素對照品置量瓶中，用甲醇配成五味子甲素960.0μg/mL和五味子乙素960.0μg/mL對照品儲備液。分別精密吸取對照品儲備液0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0mL置25mL容量瓶中加甲醇稀釋至刻度。

2. 供試品溶液的制備

取更年安糖衣片10片，去糖衣，稱重（0.36克/片)，研細，精密稱取1g，置25mL容量瓶中，精密加環(huán)己烷至刻度，超聲10min，過濾至50mL錐形瓶中，水浴加熱，揮干。殘渣用甲醇-乙腈（1∶1)10mL少量多次提取，每次超聲10min，提取液置25mL容量瓶中定容，搖勻。用微孔濾膜過濾。棄去初濾液，續(xù)濾液備用。

1. 標準曲線的建立

按上述色譜條件，分別重復進樣，測定，記錄峰面積。分別以五味子甲素對照品峰面積均值A和五味子乙素對照品峰面積均值A對其濃度C（μg/mL)線性回歸，得回歸方程：

五味子甲素：A=21485C-4737，r=0.9996

五味子乙素：A=14729C 2470，r=0.9998

五味子甲素和五味子乙素均在1.0～80μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2. 樣品含量測定　

精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，依法進樣測定，外標法計算五味子甲素和五味子乙素的含量。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

崔蘭貴，王火，朱鐵梁等等，HPLC法測定更年安中五味子甲素和五味子乙素的含量，中草藥，2001，32（5)：409～411