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1.1材料成年雌性Wistar大鼠36只， 體質(zhì)量（220±30) g,由解放軍第252醫(yī)院實驗動物中心提供,標準嚙齒動物喂養(yǎng). 替米沙坦片（商品名為美卡素)：40 mg/片，德國勃林格殷格翰國際公司產(chǎn)品［1］，丙二醛(MDA)測定試劑盒、蛋白質(zhì)定量(雙縮脲法)試劑盒、谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供.
1.2方法
1.2.1動物分組和模型制備將36只大鼠隨機等分成3組: 假手術(shù)組(SG)，腹主動脈縮窄組(operation group, OG)，替米沙坦+腹主動脈縮窄組(TM＋OG),每組12只. 腹主動脈縮窄組和替米沙坦+腹主動脈縮窄組大鼠0.1 g/mL烏拉坦(0.7 g/kg) 腹腔麻醉,左上腹切口,使腹主動脈充分暴露,在雙腎動脈上方0.5 cm處將8號針頭與腹主動脈共同結(jié)扎,拔除針頭,造成腹主動脈管腔環(huán)形縮窄約50%～60%. 假手術(shù)組同期開腹不結(jié)扎作對照. 術(shù)后青霉素50000 U/只肌肉注射1 wk,預防感染［2-3］；TM＋OG每天灌胃給藥3 mg/kg［4］，余兩組灌等量生理鹽水.
1.2.2大鼠血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量測定斷頭處死大鼠，取全血標本，3000 r/min離心15 min，生化自動分析儀檢測血清Cr和BUN含量.
1.2.3腎組織勻漿蛋白含量測定取新鮮腎臟皮質(zhì)組織300 mg，置于玻璃勻漿器內(nèi)，按1∶9比例加入冰生理鹽水后，研磨成100 mg/L組織勻漿, 3000 r/min離心10 min，取其上清夜待測；按試劑盒操作表制備空白管、標準管和各測定管；將各管混勻，37℃水浴10 min；流水冷卻后，波長540 nm，光徑1 cm，空白管調(diào)零，測各管吸光度值（A540 nm)，按公式計算腎組織勻漿蛋白質(zhì)含量.
1.2.4腎組織勻漿MDA含量測定按試劑盒操作表制備空白管、標準管和各測定管；旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮薄膜扎緊，用針頭刺一小孔；95℃水浴，40 min；取出后流水冷卻，3500 r/min，離心10 min；取上清夜，532 nm處，1 cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度值（A532 nm),按公式計算各管腎組織勻漿中MDA含量，以nmol/mg表示.
1.2.5腎組織勻漿GSH含量測定按試劑盒操作表制備空白管、標準管和各測定管；充分混勻，室溫靜置5 min；于412 nm處，0.5 cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測定各管吸光度值（A412 nm),按公式計算各管腎組織勻漿中GSH含量，以mg/g prot表示.
統(tǒng)計學處理: 實驗數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行隨機區(qū)組設(shè)計多個樣本比較的Friedman M檢驗及多相關(guān)樣本兩兩比較的q檢驗醫(yī).學全.在.線網(wǎng)站f1411.cn.
2結(jié)果
2.1一般情況OG組和TM＋OG組在腹主動脈縮窄術(shù)后第一天即出現(xiàn)進食量下降，以后逐漸出現(xiàn)毛發(fā)無光澤，活動減少，不同程度呼吸急促，四肢及口唇發(fā)紺，尿量減少，肛周毛發(fā)較濕臟亂，部分大鼠甚至出現(xiàn)拒食. 兩組大鼠體質(zhì)量下降，各有兩只大鼠死亡. 而SG組一般情況正常，無大鼠死亡.
2.2大鼠血清Cr和BUN含量OG血清Cr, BUN含量明顯升高， 與SG相比， 存在統(tǒng)計學差異(P<0.01)，表明腹主動脈縮窄模擬壓力超負荷大鼠模型成功建立；TM＋OG血清Cr, BUN含量雖然也高于SG，但低于OG，且有統(tǒng)計學差異(P<0.01)，表明替米沙坦能減輕壓力超負荷腎臟損壞作用(表1).表1替米沙坦對壓力超負荷大鼠腎功能的影響
2.3大鼠腎組織勻漿MDA和GSH含量OG和TM＋OG腎組織MDA含量均高于SG (P<0.01)，腎組織GSH含量，兩組也低于SG (P<0.01)，表明壓力超負荷對大鼠腎組織可造成明顯的過氧化損傷. 但與OG相比，TM＋OG腎組織中MDA含量低于OG (P<0.01)，GSH含量高于OG (P<0.05)，表明替米沙坦能抑制壓力超負荷引起的腎臟組織中MDA含量升高和GSH含量下降(表2).表2替米沙坦對壓力超負荷大鼠腎臟脂質(zhì)過氧化的影響
3討論
研究發(fā)現(xiàn)，老年鼠血清以及骨骼肌線粒體中抗氧化物酶如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶，非酶抗氧化劑如還原型谷胱甘肽、維生素C、維生素E等水平可明顯減少［5］. MDA 是脂質(zhì)過氧化反應的產(chǎn)物之一，組織中MDA 含量可反映脂質(zhì)過氧化的程度，并間接反映該組織損傷情況. 脂質(zhì)是生物膜的主要成分，當自由基與活性氧攻擊生物膜時，對生物膜易造成過氧化損害，同時產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA. 生物膜的過氧化損傷會導致其通透性增加、流動性下降、膜蛋白功能異常等變化，影響和破壞生物膜正常的生理功能，從而對細胞造成損傷［6-7］醫(yī).學全.在.線網(wǎng)站f1411.cn.
GSH是一種自由基清除劑，它可清除LOOH，H2O2，O2-. GSH通過與GSHPx酶共同抑制脂質(zhì)過氧化的啟動或終止脂質(zhì)過氧化的發(fā)展，從而阻斷新自由基產(chǎn)生，間接清除自由基. GSH亦可直接清除自由基，GSH可在GSHPx的作用下從H2O2處接受電子，發(fā)生自身氧化，從而阻斷OH生成；GSH還可將一些脂質(zhì)自由基、脂質(zhì)過氧化自由基直接還原，從而清除有害的過氧化物代謝產(chǎn)物，阻斷脂質(zhì)過氧化鏈鎖反應，從而起到保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用［8-9］. 谷胱甘肽是蛋氨酸、甘氨酸和半胱氨酸組成的一種三肽，是組織中主要的非蛋白質(zhì)巰基化合物，并且是GSHPX和GST兩種酶的底物，為這兩種酶分解過氧化物所必需，它能穩(wěn)定含巰基的酶和防止血紅蛋白及其它輔助因子受氧化損傷. 缺乏或耗竭GSH會促使許多化學物質(zhì)或環(huán)境因素產(chǎn)生中毒作用或加重其中毒作用，這可能與增強過氧化損傷有關(guān)［10］，因此，GSH含量是衡量機體抗氧化能力大小的重要因素.
