醫(yī)學(xué)論文范文:ICAM��1在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎發(fā)病機(jī)制中的作用

1.2  方法

1.2.1  制備動物模型  MBP提取方法與動物模型制備方法沿用我們以往建立的方法［2］。EAE的嚴(yán)重程度依據(jù)Kono等［3］的標(biāo)準(zhǔn)評定。

1.2.2  免疫組化法檢測血腦屏障ICAM��1的表達(dá)  取發(fā)病高峰期的EAE大鼠和對照組大鼠各7只，剝?nèi)〈笫蟮?a class="channel_keylink" href="http://f1411.cn/photos/200909/159335.shtml" target="_blank">小腦，福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，每隔5張取2張，每份標(biāo)本選出6張切片。使用ZYMED公司SP試劑盒，采用三步法進(jìn)行免疫組化染色。用Nikon圖像掃描系統(tǒng)進(jìn)行觀測。采用美國IPP圖像分析軟件進(jìn)行灰度分析。每只大鼠取12張片子，沿矩形路線觀測。

1.2.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  數(shù)據(jù)資料用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，采用兩組間均數(shù)比較的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(雙側(cè))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2  結(jié)果

2.1  發(fā)病情況與體重變化  實(shí)驗(yàn)組25只大鼠全部發(fā)病，起病時(shí)間為(10.74±1.19)d，評分在1分以上者達(dá)100%，評分在4分以上者達(dá)45%，病死率12%。依照Kono等的評分標(biāo)準(zhǔn)，平均得分為(3.54±0.75)分。從注射抗原后0天到第15天，平均體重減輕(28.6±16.6)g；而對照組25只大鼠無一發(fā)病，體重隨鼠齡的增大而持續(xù)增長，至注射后第15天，平均體重增長(14.2±5.1)g。

2.2  腦、脊髓組織的病理改變  取發(fā)病高峰期EAE大鼠和對照組大鼠的腦和脊髓，石蠟切片，常規(guī)HE染色，光鏡下可見EAE大鼠的腦和脊髓組織中有大量炎性細(xì)胞浸潤(主要是淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)，炎性細(xì)胞主要聚集在血管周圍，形成典型的“袖套”樣改變［4��6］，而對照組大鼠腦和脊髓組織未見炎性細(xì)胞浸潤和神經(jīng)細(xì)胞的變性、壞死醫(yī).學(xué).全.在.線f1411.cn。

2.3  免疫組化法檢測血腦屏障血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM��1的表達(dá)  鏡下觀察發(fā)現(xiàn)EAE組大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM��1的染色明顯深于對照組，血管內(nèi)皮細(xì)胞陽性反應(yīng)呈明顯的棕黃色。尤其在脈絡(luò)叢的血管內(nèi)皮細(xì)胞處陽性反應(yīng)更為明顯。運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，測量ICAM��1的灰度值(灰度值是反映透光密度的定量指標(biāo)，它與ICAM��1表達(dá)的量呈負(fù)相關(guān)，即灰度值越高，表示ICAM��1蛋白表達(dá)量越少；而灰度值越低，則表示蛋白表達(dá)量越多)［7］。從統(tǒng)計(jì)結(jié)果可見實(shí)驗(yàn)組的灰度值為141.47±6.88，而對照組為166.24±7.24，兩組比較，差異有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3  討論

EAE的病理特征之一是在腦白質(zhì)部位小血管周圍產(chǎn)生以T細(xì)胞為主的炎細(xì)胞浸潤、水腫、脫髓鞘等病理改變。而血腦屏障是一種存在于血液循環(huán)與腦組織之間的屏障結(jié)構(gòu)，主要由毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞組成。正常情況下，蛋白質(zhì)一類大分子物質(zhì)不能通過血腦屏障，甚至一些極性小分子也只能緩慢地進(jìn)入腦內(nèi)［8］。因此，在健康動物CNS內(nèi)很難檢測出T細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞。在本實(shí)驗(yàn)中，發(fā)病動物的CNS中可見到大量T細(xì)胞，說明T細(xì)胞通過某種機(jī)制穿越了血腦屏障而進(jìn)入CNS造成炎癥損傷。

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