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1.2.5 免疫組化檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面Fas、FasL表達(dá)：分離的淋巴細(xì)胞滴加在防脫片載玻片上，晾干后放入4%多聚甲醛中浸泡,室溫下固定2 h,蒸餾水洗滌2 min×2次,室溫下涼干即成標(biāo)本片;標(biāo)本片放入-20℃冰箱存放待用。按照試劑盒說(shuō)明書操作，陰性對(duì)照用PBS代替一抗，余步驟相同。封片后每張切片選擇5個(gè)不同視野采用IMAGEPRO PLUS圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，結(jié)果以光密度值表示。
1.2.6 肺組織標(biāo)本留取及組織形態(tài)學(xué)觀察：取未經(jīng)支氣管灌洗的大鼠肺臟，觀察肺臟大體病理改變。左肺上葉注入4%多聚甲醛5 ml,取下置于4%多聚甲醛中固定1周。取固定的肺組織常規(guī)石蠟包埋、切片，常規(guī)HE 染色;普通光學(xué)顯微鏡下觀察肺臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。
1.3 統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，用F檢驗(yàn)進(jìn)行兩樣本方差齊性檢驗(yàn)，重復(fù)測(cè)量資料用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用q檢驗(yàn)。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。
2 結(jié)果
2.1 哮喘組大鼠臨床癥狀及組織病理學(xué)觀察 哮喘組大鼠在卵白蛋白激發(fā)過(guò)程中，表現(xiàn)出蜷伏不動(dòng)，呼吸急促，口唇爪有不同程度紫紺，張口呼吸，大小便失禁，連續(xù)激發(fā)后毛色失去光澤，煩躁不安。刺激數(shù)天后部分大鼠癥狀逐漸加重。對(duì)照組大鼠無(wú)上述變化，治療組變化明顯減輕。
光鏡下哮喘肺組織支氣管黏膜增厚,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),管腔狹窄,肺泡上皮細(xì)胞破壞，對(duì)照組大鼠支氣管壁光滑、完整,支氣管、血管周圍未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。治療組變化較哮喘組明顯減輕。
2.2 淋巴液、血液、BALF中的淋巴細(xì)胞△·ψm水平比較 哮喘組大鼠在2、6、12、24、48 h各時(shí)間點(diǎn)淋巴液中的淋巴細(xì)胞△·ψm峰值較對(duì)照組和治療組明顯升高(P<0.001);血液中的淋巴細(xì)胞△·ψm峰值均較對(duì)照組和治療組明顯升高(P<0.05);BALF中的淋巴細(xì)胞△·ψm峰值均較對(duì)照組和治療組明顯升高(P<0.01);治療組各時(shí)間點(diǎn)淋巴液、血液和BALF中淋巴細(xì)胞△·ψm峰值與對(duì)照組均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，詳見(jiàn)表1。表1 淋巴液、血液、BALF中的淋巴細(xì)胞△·ψm水平比較
2.3 淋巴液、血液、BALF中淋巴細(xì)胞Fas蛋白表達(dá)比較 哮喘組大鼠在2、6、12、24、48 h 各時(shí)間點(diǎn)淋巴液中淋巴細(xì)胞表面Fas蛋白表達(dá)均較對(duì)照組和治療組明顯降低(P<0.001), 血液中的淋巴細(xì)胞表面Fas蛋白表達(dá)均較對(duì)照組和治療組明顯降低(P<0.05)，BALF中的淋巴細(xì)胞表面Fas蛋白表達(dá)均較對(duì)照組和治療組明顯降低(P<0.01)，治療組各時(shí)間點(diǎn)淋巴液、血液和BALF中淋巴細(xì)胞表面Fas蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，詳見(jiàn)表2。表2 淋巴液、血液、BALF中淋巴細(xì)胞表面Fas蛋白表達(dá)比較醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站f1411.cn 支氣管哮喘大鼠淋巴液中淋巴細(xì)胞線粒體跨膜電位變化及地塞米松對(duì)其干預(yù)的影響
