| 1．健康動物的選擇。 2．性別辨認。 3.動物稱重、編號和分組； (1)稱重；稱量大、小鼠體重的秤，其感應(yīng)量需在0.1g以下，并經(jīng)過校正。稱量時注意輕抓輕放動物，避免激惹，等動物安靜后記錄體重讀數(shù)，以g表示。 (f1411.cn/wsj/2)編號：以染色法編號。用苦味醒酒精飽和液為染料。以黃色為個位數(shù)號碼，紅色為十位數(shù)號碼。一股以頭部為1號，按順時針依次右前肢為2號，右腰為2號，右后肢為4號，尾根部為5號，右后肢為s號，左腰為7號，左前肢為8號，后背為9號，10號為在頭部染紅色標記，11號在右前肢染紅色和黃色標記各一，依次類推。 (3)隨機分組。 4．劑量設(shè)置 由指導教師根據(jù)受試物類別，選擇LD50計算方法設(shè)計劑量組。 5．受試物的配制 (1)量取受試物：固體化學物采用稱量法，液體化學物可用稱量法或吸量法 1)稱量法：將受試物放入已知重量的容器內(nèi)稱重。加溶劑溶解或稀釋，傾入刻度容器（如容量瓶)內(nèi)，混勻，再加溶劑至刻度。算出濃度(rog／mi)備用。 2)吸量法：依設(shè)計劑量計算出應(yīng)吸取液態(tài)受試物的容積，加入容量瓶中，用溶劑加至 刻度。計算公式為： X＝A*V/d*1000 式中；x：應(yīng)吸取受試物的容積(mD； A：設(shè)計要求的受試物濃度(mg／ml： V：容量瓶容積(m1)； d；受試化學物比重。 (2)受試物的稀釋 1)等濃度稀釋法：將受試化學物配成一種濃度，此時各劑量組的實驗動物將給予不同體積的受試物。例如受試物配成1000mg／lOml的溶液，五個劑量組的劑量分別為100、200、400、800、1600mg／kg，則各劑量組動物將依次給予1.0mi／kg、2．Omi／kg直至最高劑量組的16mi／kg。 2)等容量稀釋法：按照事先設(shè)計的劑量分別稀釋配制為幾種不同濃度的受試物溶液，各個劑量組的動物均給予相同單位體重體積的受試化學物。如上例的情況，將受試物別配成l00mg／10ml、200mg／l0ml、400mg／10ml、800mg／10ml、1600mg／10ml 5個濃度，溶液，各劑量組動物給予受試物的體積均為l0ml／kg。 6、灌胃操作 小鼠、大鼠及豚鼠灌冒法：采用專用小鼠和大鼠灌胃針，也可自制。將頭的16號注射針(適用于小鼠)或20~24號腰穿針(適用于大鼠、豚鼠)(注意事先可用錫在針尖周圍焊一圓頭，使其不易損傷動物的消化遭)安裝在適當容積的注射器上，吸所需的受試物溶液，左手抓住動物雙耳后至背部的皮膚(小鼠僅抓住耳后、頸部的皮膚，無名指、小手指和大魚際肌將其尾根部壓緊)，將動物固定成垂直體位，腹部面向操作。注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持注射器，將針頭由動物口腔側(cè)插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑人食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即深人至胃部。如遇動物掙扎，應(yīng)停止進針或?qū)⑨槹纬�，千萬不能強行插入，以免穿破食，甚至誤入氣管，導致動物立即死亡。 一般進針深度小鼠2.5～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm。為了驗明是否已正確地插入胃部，可輕輕回抽注射器，如無氣泡抽出，表明已插入胃中；如有大量氣泡，則提示誤插氣管，應(yīng)抽出重插。隨后將受試物溶液注入。灌胃容量小鼠通常為o．2～1ml，大鼠1～4ml，豚鼠l～5ml。 7．中毒體征和動物死亡情況觀察 染毒后注意觀察毒性體征和死亡情況。高劑量組動物的死亡常很快發(fā)生，染毒后應(yīng)即刻密切觀察。觀察和記錄中毒體征及出現(xiàn)的時間、死亡數(shù)量和時間及死亡前的特征。根據(jù)觀察情況分析中毒特點和毒作用靶器官． LD50計算：根據(jù)受試物的種類由指導教師事先確定采用何種方法(改進寇氏法、霍恩法等)進行計算，并在試驗前設(shè)計劑量分組和每組動物數(shù)。選擇適宜的方法求出LD50及95％的可信限范圍．如毒性反應(yīng)存在性別差異，應(yīng)分別求出不同性別動物的LD50值。 | 
