如果在測定活性之前所貯的樣品酶活性有了降低,無論所用的儀器如何先進,也不能獲得準確的結果。在適當的條件下酶會失活,因而必須強調在收集樣品之后應盡可能快速測試酶活性,最好當天進行測定。關于酶樣品的貯存與醫(yī)學網處理應注意以下幾點:
1.酶活力測定最常用的樣品是血清或血漿。制備血漿所用的抗凝劑可抑制某些酶的活性,如E DTA 能抑制A LP ,草酸鹽抑制LDH ,肝素對CK 及某些其他酶有輕微的抑制作用,故一般樣品以血清為佳。
2.多數血清酶以較高濃度存在于紅細胞、白細胞或血小板中。因此分離血清時應注意避免溶血。
3.光照對C K 活性有抑制作用,因此,主張C K 測定的血清應貯存于4 ℃ 的暗處,測定時應該注意避光。
4.由于血清白蛋白對酶蛋白有穩(wěn)定作用,在它的存在下,某些酶(如轉氨酶)在室溫下可保存1~2 天而無明顯失活。
5.有些酶由于自身的特性,在貯存時需特別加以注意。例如L DH 同工酶(L DH 3 、LDH 4 、LDH 5) 在冰箱保存不穩(wěn)定,在室溫反而穩(wěn)定時間較長,所以測定L DH 活力的血清樣品,應置于室溫下,2~3天內可保持穩(wěn)定,不能存放冰箱過夜。
6.由于酶很容易發(fā)生表面變性,因此在操作時應避免形成泡沫。
7.巰基(-SH )對于大多數酶來說是十分重要的,可能起如下幾方面的作用:① 參與催化;② 和底物結合;③ 組成變構部位;④ 維持酶的三級或四級結構。因此,使巰基保持天然狀態(tài)是使許多酶穩(wěn)定化的最重要的條件之一,基于這個理由,在酶的活性測定、抽提、制備以及保存過程中,?商砑樱璖 H 保護劑,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇等。