三、電泳分析
在實(shí)際工作中常采用瓊脂糖凝膠電泳。一般情況下先在電泳緩沖液或凝膠中加1%溴化乙錠（EB)（每100ml加100μl)，然后將已經(jīng)制備好的1%～2%瓊脂糖凝膠（用電泳緩沖液配制)放入電泳槽內(nèi)，加入待測(cè)樣品10μl，同時(shí)用分子量標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)記。瓊脂糖濃度應(yīng)按分離DNA片段的大小進(jìn)行選擇，一般用1.5%～2%，電泳電壓75V，待樣品進(jìn)行凝膠內(nèi)距膠末端1cm時(shí)，切斷電源，取出凝膠在紫外燈下直接觀察結(jié)果。
由于溴化乙錠可與雙鏈DNA形成結(jié)合物，在紫外燈下能發(fā)射熒光，使EB的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)80～100倍，所以，電泳后凝膠在紫外燈下可直接觀察。一般肉眼觀察DNA量可達(dá)10ng，其熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。
DNA分子在凝膠中泳動(dòng)速度決定于電荷效應(yīng)及分子效應(yīng)。前者由所帶凈電荷量決定，而后者與分子大小及構(gòu)型有關(guān)。按照DNA分子大小，其凝膠濃度可做不同的調(diào)整。有條件的實(shí)驗(yàn)室也可用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE)分析擴(kuò)增的DNA片段。
表22-2 電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，EB熒光顯色（254nm)
| 瓊脂糖（%) | kb | PAGR(%) | bp |
| 0.3 | 60～5 | 3.5 | 100～1000 |
| 0.6 | 20～1 | ||
| 0.7 | 10～0.8 | 5.0 | 80～500 |
| 0.9 | 7～0.5 | 8.0 | 60～400 |
| 1.2 | 6～0.4 | 12.0 | 40～200 |
| 1.5 | 4～0.2 | 20.0 | 10～100 |
