二、肝硬變免疫細胞化學(xué)
肝硬變或稱肝硬化（liver cirrhosis)是多種原因引起的慢性肝臟疾病，其中原因之一是和HBV慢性感染有關(guān)，特別在中國HBV可能是引起肝硬變的主要原因。HBV感染引起乙型肝炎，部分病例變成慢性活動性肝炎，進而轉(zhuǎn)變成肝硬變。其中大部分為門脈性肝硬變（小結(jié)節(jié) 型肝硬變)，小部分為壞死后性肝硬變（大結(jié)節(jié) 型肝硬變)。近年來在我國通過臨床、病理及免疫病理的研究證明，HBV感染與肝硬變的發(fā)生有十分密切關(guān)系，在肝硬變內(nèi)HBsAg檢出率為70%～90%。世界其它一些國家和地區(qū)，如日本、印度、非州、香港等也有類似的報道。肝硬變的發(fā)生可能是由于機體免疫機能不足，不能將HBV完全殺滅和排除。在機體內(nèi)HBV不斷復(fù)制繁殖，并通過免疫機制使肝細胞反復(fù)遭受破壞，以及肝細胞結(jié)節(jié) 狀再生，纖維組織不斷增生，形成纖維隔，致使正常的肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，最后形成肝硬變。下面用免疫細胞化學(xué)（PAP)，親合免疫細胞化學(xué)（ABC)等方法對HBV抗原、纖維結(jié)合蛋白（FN)、III型膠原和細胞角蛋白在肝硬變組織內(nèi)定位及分布進行描述。
�。ㄒ�)肝硬變組織內(nèi)HBV抗原的定位及分布
用免疫細胞化學(xué)（PAP)及免疫親合素（ABC)方法在肝硬變組織內(nèi)對HBV抗原（HBsAg ,pre –S1,pre-S2,HBcAg HBxAg)進行了檢測，觀察了它們在肝細胞，kupffer 細胞內(nèi)等定位和其分布狀態(tài)。
1．HBsAg 、pre –S1和pre-S2在肝細胞內(nèi)分布HBsAg在肝硬變組織中檢測率為70%～80%，其中86%伴有肝細胞不典型增生；pre –S1和pre-S2的檢出率為60%～70%，其中84%伴有肝細胞不典型增生。HBsAg 、pre –S1和pre-S2抗原經(jīng)常出現(xiàn)于肝硬變組織的同一部位，甚至同一細胞內(nèi)。少數(shù)情況下，HBsAg陽性,而pre –S1或pre-S2陰性，反之，HBsAg 陰性,而pre –S1或pre-S2陽性。HBsAg 、pre –S1和pre-S2抗原主要位于肝細胞漿內(nèi)，部分位于膜上，少數(shù)位于核內(nèi)。在部分肝硬變病例中，HBsAg 、pre –S1和pre-S2在也見于kupffer細胞內(nèi)及肝內(nèi)膽管上皮細胞內(nèi)。醫(yī).學(xué).全.在.線.網(wǎng).站.提供
2．HBcAg 在肝細胞內(nèi)的分布HBcAg 在肝硬變組織內(nèi)的檢出率為20%左右，其中82%伴有肝細胞不典型增生。HBcAg 陽性檢出率明顯低于HBsAg 、pre –S1和pre-S2，這可能是由于HBcAg 和抗-HBc在核內(nèi)形成免疫復(fù)合物，以至HBcAg 被封閉之故。HBcAg 主要位于肝細胞核內(nèi)的形態(tài)表現(xiàn)為分布與肝炎的相似。在少數(shù)病例HBcAg 陽性物質(zhì)也見于匯管區(qū)的纖維組織內(nèi)及肝竇壁上。
3．HBxAg 在肝細胞內(nèi)的分布HBxAg在硬變組織的檢出率為80%左右，其中85%伴有肝細胞不典型增生。HBxAg的檢出率和HBsAg相似。HBxAg陽性物質(zhì)呈細顆粒狀。主要位于肝細胞漿內(nèi)，少數(shù)位于胞核內(nèi)及胞膜上。HBxAg在肝細胞內(nèi)的形態(tài)表現(xiàn)及陽性細胞的分布狀態(tài)與HBsAg相似。有部分病例HBxAg沿著肝硬變的纖維隔分布。HBxAg陽性物質(zhì)也見于肝內(nèi)膽管上皮細胞及kupper細胞內(nèi)。
4．IgG(抗—HBc )在肝細胞內(nèi)的分布在肝硬變組織內(nèi)可觀察到抗-HBc的存在，其陽性率與HBcAg相似。該抗體經(jīng)常和HBcAg以復(fù)合物的形式存在于肝細胞核內(nèi)，少數(shù)也見于胞漿內(nèi)及膜上�？�-HBc陽性物質(zhì)在肝硬變細胞內(nèi)的存在和陽性細胞的分布狀態(tài)與HBcAg相同。
�。ǘ�)肝硬變組織內(nèi)纖維結(jié)合蛋白（FN)的定位及分布
纖維結(jié)合蛋白（fibronectin, FN)是一個非膠原性的大分子糖蛋白。近年來研究發(fā)現(xiàn)它與損傷修復(fù)及器官硬化有密切關(guān)系。在肝硬變及慢活肝的組織內(nèi)FN沉積增加，可能與肝硬變時纖維組織隔形成有關(guān)系。在肝硬變組織內(nèi)，F(xiàn)N陽性物質(zhì)位于肝細胞內(nèi)及kupffer細胞內(nèi)，其陽率分別為59%、65%。FN陽性物質(zhì)彌漫分布于胞漿內(nèi)，陽性細胞多呈三五成群地分布于假小葉邊緣、中央靜脈旁及肝實質(zhì)內(nèi)灶（片)狀杯死區(qū)域的附近。匯管區(qū)及纖維隔內(nèi)可見數(shù)量不等的FN陽性的組織細胞和纖維母細胞。此外。有的病例肝竇壁、血管內(nèi)皮及小膽管基底膜也呈陽性反應(yīng)。FN陽性檢出率和HBsAg陽性呈正相關(guān)，在FN陽性病例中有80%HBsAg陽性。而活動性肝硬變FN陽性明顯高于非活動性肝硬變（P<0.01)。上述結(jié)果表明，在由HBV感染引起的肝硬變過程中，F(xiàn)N參與了肝硬變的形成。
�。ㄈ�)肝硬變組織內(nèi)III型膠原的定位及分布
在肝硬變時，I、III型膠原增加，這與肝纖維化有密切關(guān)系。實驗結(jié)果證明，在慚性遷延性肝炎→慢性活動性肝炎→肝硬變之間，Ⅰ、Ⅲ型膠原的分布呈逐漸增加的趨勢。除匯管區(qū)Ⅰ、Ⅲ型膠原增多外，中央靜脈周圍及小葉內(nèi)壞死區(qū)、炎癥區(qū)也增多，形成小葉內(nèi)纖維化與從匯管伸向小葉內(nèi)纖維組織相連形成纖維隔。在部分肝硬變病例，肝細胞內(nèi)有Ⅲ型膠原陽性反應(yīng)。在纖維隔及假小葉的竇壁上Ⅲ型膠原陽性率為100%，在肝細胞內(nèi)為34%。Ⅲ型膠原在寬大纖維隔內(nèi)呈彌漫密集分布，在竇壁上為連續(xù)線狀分布，在肝細胞漿內(nèi)呈彌漫分布。陽性肝細胞主要位于小葉邊緣或近纖維隔處。動物實驗證明Ⅰ、Ⅲ膠原是由肝細胞合成產(chǎn)生的，并參與肝硬變的形成。
（四)肝硬變組織內(nèi)角蛋白定位及分布
在正常肝臟中肝細胞和膽管上皮細胞各有其特征性的細胞角蛋白（CK)組型，它們是各自形態(tài)發(fā)生的過程中建立的。研究結(jié)果表明在肝硬變組織中有81%呈角蛋白陽性反應(yīng)，但陽性反應(yīng)程度各病例是不相同的。CK陽性的肝細胞主要位于匯管區(qū)周圍。尤其是碎屑狀肝細胞壞死附近，并常伴有肝細胞小管狀化生、弧立肝細胞團塊形成及膽管或膽小管增生，它們之間在細胞形態(tài)和陽性強度上有移行關(guān)系，有的病例整個假小葉CK陽性。部分肝小多角型細胞也呈陽性反應(yīng)。在肝硬變組織內(nèi)CK陽性反應(yīng)與HBsAg陽性呈正相關(guān)。CK陽性的肝硬變中絕大多數(shù)HBsAg也陽性，這一結(jié)果HBV感染所致的慢性肝臟病變可引起CK的異常表達。
