二、基因突變類型
在明確了細(xì)菌培養(yǎng)環(huán)境條件僅起選擇作用后，學(xué)者們采用了一些選擇方法以獲得突變株，這些突變株的應(yīng)用對(duì)研究遺傳變異及開(kāi)展有基因工程都很有幫助。大從數(shù)利用的突變型均為大腸桿菌或鼠傷寒沙門(mén)氏菌，因這兩種細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，僅需鹽、微量金屬離子及有限的氮、碳來(lái)源即可生長(zhǎng)繁殖。未發(fā)生突變的菌株稱為野生型，而發(fā)生突變的菌株則根據(jù)選擇條件可分為：
1．營(yíng)養(yǎng)缺陷型：突變后因某種酶的缺失需要額外添加某種營(yíng)養(yǎng)成份方能生長(zhǎng)繁殖者。一般用“+”代表能利用自然存在的某種成份或能合成某種成份的中間體，而“—代表不能合成該成份的菌株。如his-則代表組氨酸缺陷型，需在培養(yǎng)基中加入組氨酸。
2.抗性突變型:一般以S代表對(duì)化學(xué)藥物或抗生素敏感,r代表有抵抗力。如str8代表該菌株對(duì)鏈霉素敏感，在有鏈霉素存在時(shí)不能生長(zhǎng)。這類突變型最易獲得，應(yīng)用亦廣。
3．發(fā)酵陰性突變型：突變后失去發(fā)酵某種糖的能力但仍能利用其他糖做為碳源。這是由于突變后失去能分解該糖的酶。由于乳糖發(fā)酵可用指示劑根據(jù)pH改變而顯示，故可Lac-（乳糖發(fā)酵陰性)突變株作為研究工具。
圖5－2 細(xì)菌影印培養(yǎng)試驗(yàn)
| 1．從普通培養(yǎng)基上將皿上長(zhǎng)的細(xì)菌，用絲絨影印至含鏈霉素培養(yǎng)基上，耐菌細(xì)菌不多。 |
| 2．從不接觸鏈霉素的平皿上，按影印顯示耐鏈霉素菌落區(qū)挑取細(xì)菌增菌。 |
| 3．將102細(xì)菌接種普通培養(yǎng)基上再作影印，再按耐鏈霉素平皿上相應(yīng)菌落處接種增菌。 |
| 4．未接觸鏈霉素的平皿上，全部細(xì)菌均耐鏈霉素。 |
4．條件致死性突變型：在某一條件下具有致死效應(yīng)，突變株不能生長(zhǎng)，但在另一沒(méi)有致死效應(yīng)的條件下仍可生長(zhǎng)。最常用者為溫度敏感性突變型。它們?cè)谟H代能生長(zhǎng)的溫度范圍內(nèi)特別是較高濕度（42℃)不能生長(zhǎng)，但在較低溫度（25℃)則能生長(zhǎng)。這種菌株稱為ts株。其發(fā)生的原因是某些酶的肽鏈結(jié)構(gòu)發(fā)生改變后，降低了酶的抗熱性。因此在較高溫度下不能生存。這種用溫度篩選突變株的方法比較簡(jiǎn)便，應(yīng)用較多。
